Die Wirkung von Advocate basiert auf den zwei unterschiedlichen Wirkmechanismen seiner Inhaltsstoffe.

Moxidectin wird durch die Haut ins Blut übernommen und dann im gesamten Organismus verteilt. Hier wirkt es sowohl gegen Endoparasiten als auch gegen Ektoparasiten. Der Wirkstoff setzt an den durch Glutamat und GABA gesteuerten Chloridionenkanälen der Zellmembran an. Diese Membran wird durchlässiger für Chlorid-Ionen. Die strömen vermehrt in die Zelle und erzeugen dort ein nicht reversibles Ruhepotenzial. Das zieht also eine schlaffe Lähmung nach sich und dadurch den Tod des Parasiten. Moxidectin stört also die Erregungsleitung der Parasiten.

Der zweite Wirkstoff, Imidacloprid, verteilt sich in der Lipidschicht von Haut- und Haaroberfläche. Es wirkt dort als Kontaktgift ebenfalls auf das Nervensystem von Arthropoden. Der Wirkstoff besitzt eine hohe Affinität zu nicotinergen Acetylcholin-Rezeptoren in der postsynaptischen Membran von Zellen des zentralen Nervensystems. Dadurch unterbricht es die Acetylcholin-vermittelte Reizleitung. So führt es zu unkontrolliertem Zittern, Schäden an Nerven, Ganglien und Muskeln und letztendlich zum Tode der Parasiten.
Diese Wirkung ist spezifisch für Insekten und Spinnentiere. Das zentrale Nervensystem von Säugetieren beeinträchtigt Imidacloprid quasi nicht, denn es wirkt hier nur sehr schwach auf die entsprechenden Rezeptoren und ist kaum in der Lage, die Blut-Hirn-Schranke zu überwinden.

Moxidectin verteilt sich in allen Geweben, weist aber im Fettgewebe und der Leber besonders hohe Konzentrationen auf. In der Haut und in der Schleimhautoberfläche des Verdauungstraktes sind die Werte ebenfalls höher als im Plasma.

Imidacloprid verteilt sich nach dem Spotten innerhalb von Stunden auf der gesamten Körperoberfläche.

Moxidectin wird im Stoffwechsel zu verschiedenen Metaboliten umgebaut und fast gänzlich – und langsamer als Ivermectin – über den Kot wieder ausgeschieden.

Imidacloprid wird beim Spot-on nicht in den Körper übernommen. Wird der Wirkstoff oral aufgenommen, etwa durch Belecken des Spot-ons, wird er hauptsächlich über den Urin und in kleineren Anteilen über den Kot ausgeschieden.

Es wird durch die Anreicherung im Fettgewebe und die langsame Abgabe von Moxidectin und die Verteilung von Imidacloprid auf und in der Haut ein Depot erreicht.